㈠ 查一下关于微生物的基本知识
查一下关于微生物的基本知识
微生物学习中有以下几个方面：1、用途：农业微生物如食用菌;食品方面的如酵母菌；发酵方面的啤酒酵母什么的；医学方面生物制药；生物工程，环境保护。
你如果查找某一种菌类。可以先查一下他属于哪个范畴，命名分类：界、门、纲、目、科、属、种七个等级；
工具书：微生物学、微生物研究技术、食品微生物学、农业
㈡ 微生物的小知识
微生物以惊人的速度“生儿育女”。例如大肠杆菌在合适的生长条件下，12.5-20分钟便可繁殖一代，每小时可分裂3次，由1个变成8个。每昼夜可繁殖72代，由1个细菌变成4722366500万亿个（重约4722吨）；经48小时后，则可产生2.2×1043个后代，如此多的细菌的重量约等于4000个地球之重。当然，由于种种条件的限制，这种疯狂的繁殖是不可能实现的。细菌数量的翻番只能维持几个小时，不可能无限制地繁殖。因而在培养液中繁殖细菌，它们的数量一般仅能达到每毫升1－10亿个，最多达到100亿。尽管如此，它的繁殖速度仍比高等生物高出千万倍。
此外还有青霉素的发现，
巴斯德的曲颈瓶实验否定了微生物的“自然发生说”
微生物的绝对可靠性
微生物无处不在
㈢ 微生物小知识
20
世纪以来，生物化学和生物物理学向微生物学渗透，再加上电子显微镜的发明和同
位素示踪原子的应用，推动了微生物学向生物化学阶段的发展。
1897
年德国学者毕希纳发
现酵母菌的无细胞提取液能与酵母一样具有发酵糖液产生乙醇的作用，
从而认识了酵母菌酒
精发酵的酶促过程，将微生物生命活动与酶化学结合起来。
诺伊贝格等人对酵母菌生理的研究和对酒精发酵中间产物的分析，
克勒伊沃对微生物代
谢的研究以及他所开拓的比较生物化学的研究方向，
其他许多人以大肠杆菌为材料所进行的
一系列基本生理和代谢途径的研究，都阐明了生物体的代谢规律和控制其代谢的基本原理，
并且在控制微生物代谢的基础上扩大利用微生物，发展酶学，推动了生物化学的发展。从
20
世纪
30
年代起，人们利用微生物进行乙醇、丙酮、丁醇、甘油、各种有机酸、氨基酸、
蛋白质、油脂等的工业化生产。
1929
年，弗莱明发现青霉菌能抑制葡萄球菌的生长，揭示了微生物间的拮抗关系，并
发现了青霉素。
1949
年，瓦克斯曼在他多年研究土壤微生物所积累资料的基础上，发现了
链霉素。
此后陆续发现的新抗生素越来越多。
这些抗生素除医用外，
也应用于防治动植物的
病害和食品保藏。
1941
年，比德尔和塔特姆用
X
射线和紫外线照射链孢霉，使其产生变异，获得营养缺
陷型。
他们对营养缺陷型的研究不仅可以进一步了解基因的作用和本质，
而且为分子遗传学
打下了基础。
1944
年，埃弗里第一次证实了引起肺炎球菌形成荚膜遗传性状转化的物质是
脱氧核糖核酸
(DNA)
。
1953
年，沃森和克里克提出了
DNA
分子的双螺旋结构模型和核酸半
保留复制学说。
富兰克尔
-
康拉特等通过烟草花叶病毒重组试验，证明核糖核酸
(RNA)
是遗传信息的载
体，为奠定分子生物学基础起了重要作用。其后，又相继发现转运核糖核酸
(tRNA)
的作用机
制、
基因三联密码的论说、
病毒的细微结构和感染增殖过程、
生物固氮机制等微生物学中的
重要理论，展示了微生物学广阔的应用前景。
1957
年，科恩伯格等成功地进行了
DNA
的体外组合和操纵。近年来，原核微生物基因
重组的研究不断获得进展，
胰岛素已用基因转移的大肠杆菌发酵生产，
干扰素也已开始用细
菌生产。现代微生物学的研究将继续向分子水平深入，向生产的深度和广度发展。
在微生物学的发展过程中，
按照研究内容和目的的不同，
相继建立了许多分支学科：
研
究微生物基本性状的有关基础理论的有微生物形态学、
微生物分类学、
微生物生理学、
微生
物遗传学和微生物生态学；
研究微生物各个类群的有细菌学、
真菌学、
藻类学、
原生动物学、
病毒学等；
研究在实践中应用微生物的有医学微生物学、
工业微生物学、
农业微生物学、
食
品微生物学、乳品微生物学、石油微生物学、土壤微生物学、水的微生物学饲料微生物学、
环境微生物学、免疫学等。
由于微生物学各分支学科的相互配合、
互相促进，
以及与生物化学、
生物物理学、
分子
生物学等学科的相互渗透，使其在基础理论研究和实际应用两方面都有了迅速的发展
㈣ 卫生和微生物学基础知识
请在此输质量中心微生物检验员统一考试题答案部门： 姓名： 得分：一、填空题：（50分，每空1分）1、无菌生理盐水灭菌条件为（121）℃高压灭菌（15）分钟。2、 牛奶菌落总数检测方法中，待琼脂凝固后，将平板翻转，（36±1）℃培养（48±2）小时。3、根据对样品污染状况的估计，选择2个-3个适宜稀释度的样品匀液，液体样品可包括原液，在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取（1ml）样品匀液加入两个无菌平皿内。4、大肠菌群是指一群在（36）℃条件下培养48小时，能（发酵乳糖），（产酸产气）的需氧和兼性厌氧革（兰氏阴性无芽胞杆菌）。大肠菌的MPN是指（基于泊松分布）的一种间接方法。5、大肠菌群的证实试验中，凡(BGLB肉汤管产气)，即可报告为大肠菌群阳性。6、粪大肠杆菌主要包括（大肠埃希氏菌），也包括少量的（克雷伯氏菌）。7. 胆盐可抑制（革兰氏阳性菌），湟绿是（抑菌抗腐剂），可增强队革兰氏阳性菌的抑制作用。8.大肠杆菌平板计数选择菌落数为（10—100）的平板，暗室中（360nm—366nm）波长紫外灯照射下，计数平板上发（浅蓝色）荧光的菌落。7、夹膜对于细菌来说的功能是起（保护）作用，鞭毛的功能是（借助鞭毛的转动而运动）。8、金黄色葡萄球菌在Baird-Parker 平板上，菌落直径为（2mm—3mm），颜色呈（灰色到褐色），边缘为（淡色），周围为一（混浊带），在其外层有一（透明圈）。一般认为（血浆凝固阳性）的金黄色葡萄球菌菌株有致病力。9、甲基红试验方法，取适量琼脂培养物接种于缓冲葡萄糖蛋白胨水，36℃±1℃培养2d—5d。滴加甲基红一滴，立即观察节ugo。（鲜红色）为阳性，(黄色)为阴性。10、沙门氏菌生化试验中，自选择性琼脂平板上挑取 两个以上典型或可疑菌落，分别接种（三糖铁琼脂）、（赖氨酸 脱羧酶试验培养基）、（营养琼脂平板）。11、用于微生物染色的染色剂主要有三种：（酸性染色剂）（碱性染色剂）（复合染色剂）。12、影响微生物生长的物理因素（ 温度）、（ 辐射）、（超声波 ）、（过滤 ）、（渗透压）等。13、假单胞杆菌主要污染源为（水源）、（再污染）。14、药品按纯度分为（优级纯）（分析纯）（化学纯）（实验试剂）（生物试剂）。15、嗜冷菌计数培养基的保质期是（三年）。16、微生物的分类依据主要是（形态特征）、培养特征、（生理特征）及（血清反应）等。二、选择题（30分，每题2分）1、球菌可分为（ ABCDE ）。A、微球菌 B、八迭菌 C、双球菌 D四联球菌 E、链球菌2、分解蛋白的菌包括：(ABD)A、蜡样芽孢杆菌 B、枯草杆菌 C、大肠杆菌 D微球菌3、酸败乳和初乳PH一般在（C）以下，A.(6.2以下) B.(6.3以下) C.（6.4以下） D.（6.5以下）4、液体奶坏包产品中微生物可能有那些（ A ）A、革兰氏阴性杆菌B、乳酸杆菌 C、放线菌D、乳酸链球菌5、细菌个体的基本形态分别为( AC )A、球菌 杆菌 B、双球菌 螺旋菌C、弧菌 螺旋菌 D、杆菌 单球菌6、对细菌进行革兰氏染色，革兰氏阳性菌为（ A ）色。A．紫 B．蓝 C．红 D．无7、下列不属于乳品中沙门氏菌可疑菌落特征的是（ A ）。A．无色透明或透明，干燥B．光滑，中间突起C．边缘整齐，直径2～3mmD．有的菌落中央有黑色硫化铁沉淀8、菌株复壮的常用方法不包括（ D）。A．分离纯化 B．寄主复壮 C．杂交育种 D．基因自发突变9、下列关于乳脂类的物理化学性质说法不正确的是（B）A、乳中的脂类是指脂肪和类脂两类化合物B、脂类不溶于水，而溶于乙醚、丙酮、苯等无机溶剂中C、乳脂肪具有补充消耗了的脂肪和构成脂肪组织的作用D、乳中的类脂主要有磷脂、胆固醇等10、细菌性食物中毒中下列哪些菌是主要引起神经症状（D）A、福氏志贺氏菌B、副溶血弧菌C、葡萄球菌D、肉毒杆菌11、下列属于乳品中志贺氏菌属阴性反应的是（ ABCD ）。A．VP试验 B．葡萄糖铵试验 C．苯丙氨酸脱氨酶 D．西蒙氏柠檬酸盐12、对乳品中的溶血性链球菌进行染色镜检，其菌体特征为（ ABCD ）A．革兰氏阳性球菌 B．排列呈长短不等链条状 C．无芽孢，无鞭毛 D．不能运动13、关于我国GB6914生鲜牛乳收购标准的规定说法不正确的是（ AD ）。A．原料乳中的滴滴涕≤0.5mg/kgB．杂质度≤4.0mg/kgC．每毫升Ⅰ级生乳中细菌总数不得超过50万个D．每毫升Ⅱ级生乳中细菌总数不得超过200万个14、常用测定酸乳发酵剂乳酸菌活力的方法包括（ AB ）。A．刃天青还原试验 B．酸度测定 C．过氧化氢酶试验 D．磷酸酶试验15、影响细菌染色的因素有（ ABCD ）。A．细菌细胞壁、细胞膜的通透性 B．膜孔的大小 C．菌龄 D．染色液中电解质含量三、判断对错（10分，每题2分）1、平板计数琼脂的主要成分包括水、胰蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、琼脂。（对）2、国标法检测菌落总数的报告中，若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。（对）3、EC肉汤管在接种前要预热到37℃，因为这个温度是选择性生长条件之一。（错，正确是45℃）4、细菌属于原核细胞型的微生物（错）。5、芽胞与细菌有关的特性是耐热性。（对）四、名词解释及简答题（10分）1、菌落总数（GT/T4789.2-2008）：食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、PH、需氧性质等），所得1ml（或1g）检样中形成菌落的总数。本标准所规定的培养条件下所得结果，只包括一群在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温需氧或兼性厌氧的菌落总数。解答：N=∑C/(n1+0.1n2)d=（232+244+33+35）/（2+（0.1*2））*10-2 =544/0.022=24727 经四舍五入后表示为25000或2.5*104卫生和微生物学基础知识、洁净作业等方面的培训考核试题一、填空1、细菌培养温度为（ ～ ），霉菌、酵母菌培养温度为（ ～ ），控制菌培养温度为（ ～ ）。2、供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过（ ）小时。3、方法验证试验所用的菌株传代次数不得超过（ ）代，从菌种保存中获得的冷冻干燥菌种为（ ）代4、供试品检出控制菌或其它致病菌时，按（ ）次检出结果为准，不再复试。5、洁净车间（30万级）洁净要求：悬浮粒子浓度（≥0.5μm，个/m3）：（ ），沉降菌（个/皿）：≤（ ）， 换气次数（次/h）：（ ），压差（Pa）≥（ ），温度（℃）：（ ），湿度（%）：（ ），照度（勒克斯）≥（ ）6、菌种由生侧室置于冰箱保存，并备有2套，一套作（ ）专用，另一套供（ ）使用。7、培养基最好新配使用，一时用不完的可放在冰箱内保存，一般在（ ～ ）℃，普通琼脂或肉汤培养基一般不超过（ ）8、任何培养基都必须按照规定的条件制备使用，不得随意改变（ ）方法。 9、取样室或取样车必须装有紫外灯，抽样前紫外灯消毒（ ）分钟。10、盛装做微生物限度检查的样品的容器应（ ）消毒。11、取样应做到快速，取完样马上封好样品，防止样品（ ）。12、取与药品直接接触的药包材样品时，取样人员须 在（ ）内取样，样品放入洁净容器内（ ）。13、水样须在取样后（ ）测定，否则应浸于冰水内于（ ）处保存，以防止细菌繁殖或骤减，切勿将冷水冷至结冰。14、生产车间所退物料必须经质管员确认无（ ）、无混杂、数量准确、生产上可继续使用后，才能办理退料手续。15、洁净区内操作时，动作要（ ） ；不做与操作无关的动作和不必要的交谈。16、洁净区内使用的设备、容器、管道在进行清洁以后，还必须用（ ）水冲洗干净。17、当用75％乙醇或0.1%新洁尔灭溶液消毒手时，将手放入其中浸泡约（ ）分钟，再用自来水冲洗干净。18、与药品直接接触的压缩空气必须经（ ）进行处理，符合生产要求方可使用。19、物料从一般生产区进入洁净区，必须经物料净化系统，（包括外包装清洁处理室和气闸）在外包装清洁处理室对其外包装进行（ ）后经气闸进入洁净区。20、三十万级区域洁净工作服可与一般生产区工作服合用一台洗衣机，但必须（ ）洗涤，而且需在同空气洁净度级别的环境下进行整理。二、选择1、微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法，检查项目包括（ ）检查①细菌数和霉菌数 ②细菌数、霉菌数及酵母菌数 ③细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌入您的回答，每一次专业解答都将打造您的权威形象
㈤ 微生物知识
美国药典（USP）中规定：“将微生物接种至一新鲜培养基上/内，每萌发一次即称为一代，因此，当原始菌种复溶并转至一培养基内生长，即认为已传代一次，” 并规定“菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代”。我国的GMP认证中也如此要求，并且中国药典2005年版药典也已做出“菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代”这个明确的规定。
实验室菌种的传代保藏过程
1. 按菌种说明书要求复溶菌粉，转种于适当的增菌培养基内（G1），复壮后转接至平板上，并于适当温度下培养适当时间，分离出单个纯种菌落，此为第2代（G2）。
2. 菌种鉴定完成后，挑取纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管，同时挑取纯菌落转接斜面菌种作为工作用菌种。此时，保藏菌种为第2代，但工作用菌种则为第三代。
3. 将第2代菌种管冷冻保存，将工作用菌种于适当温度下培养适当时间后可用于试验。
4. 取一支冷冻保存的G2代菌种转种于平板和斜面培养基上，平板上的菌种制成冷冻保藏管第三代（G3），斜面培养基经适当温度下培养适当时间后用作工作用菌种（W3）。
5. 将第三代菌种（G3）冷冻或低温保存，将生长、转种后的G2菌种经灭菌处理后丢弃。
6. 当工作用菌种代数小于5时，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种，如W3可直接转接为W4。
7. 按上述程序操作，直至G4转为W5为止，需重新开启安瓿，再重复上述操作程序、保藏和使用菌种。
以上方法中，菌种被分为两类。传代用菌种和工作用菌种，传代用菌种用于甘油冷冻管法保藏，工作用菌种用斜面低温保藏法保藏。
实验证明，甘油冷冻管的有效期至少为2年，但其主要适用于细菌（需氧）、酵母菌的传代、保藏、对厌氧菌、真菌和芽孢类细菌则需应用其它方法。
㈥ 微生物学知识点
简述致病菌引起全身感染后，常见的几种类型？
答：①毒血症②菌血症③败血症④内毒素血症⑤脓毒血症
试述构成细菌侵袭力的物质基础。
答：①荚膜②黏附素③侵袭性物质
简述病原菌感染机体后，机体如何发挥抗菌免疫功能？
答：首先遇到机体的非特异性免疫包括皮肤与粘膜构成的屏障结构，血脑屏障，胎盘屏障及吞噬细胞对细菌的非特异性的吞噬和体液中杀菌抑菌物质对细菌的攻击。7-10天后，机体产生特异的细胞免疫和体液免疫与非特异性免疫一起杀灭病原菌
简述细菌耐药性产生的主要机制。
答：①钝化酶的产生②药物作用靶位发生改变③胞壁通透性的改变和主动外排机制④抗菌药物的不合理使用形成了抗菌药物的选择压力，在这种压力的作用下，原来只占很少比例的耐药菌株被保留下来，并不断扩大。
举例说明细菌命名的原则。
答：细菌的命名一般采用国际上通用的拉丁文双命名法。一个细菌种的学名由两个拉丁字组成，属名在前，用名词，首字母大写；种名在后，用形容词，首字母小写；两者均用斜体字。中文译名种名在前，属名在后。如Mycobaterium tuberculosis （结核分枝杆菌）。属名亦可不将全文写出，只用第一个大写字母代表，如M. tuberculosis
如何确定从标本中分离的细菌为葡萄球菌？并确定其有无致病性。
答：①直接镜检，经革兰染色后镜检发现革兰染色阳性呈葡萄状排列的球菌，可初步报告疑为葡萄球菌，需进一步分离培养鉴定。②分离培养：血培养需经增菌后转种血平板进一步鉴定，若无细菌生长，需连续观察7天，并以血平板确定有无细菌的生长。脓液、尿道分泌物、脑脊液沉淀物可直接接种血平板，37℃过夜，可形成直径约2-3mm、产生不同色素的菌落。金葡菌菌落周围有透明溶血环。③试验鉴定：血浆凝固酶试验，甘露醇发酵试验，耐热核酸酶试验，肠毒素测定，SPA检测。致病性葡萄球菌菌落周围有透明溶血环，血浆凝固酶试验阳性，甘露醇发酵试验阳性，耐热核酸酶试验阳性，SPA检测有A蛋白的存在。
什么是不耐热肠毒素（LT）？它的物理性质、基本结构、致病机理及与霍乱毒素（CT）的关系如何。
答：LT是肠产毒型大肠杆菌产生的致病物质，因对热不稳定，故称为不耐热肠毒素。其65℃30min可被破坏。LT分为LT-Ⅰ和LT-Ⅱ，LT-Ⅱ与人类疾病无关，LT-Ⅰ是引起人来胃肠炎的致病物质。其结构包括1个A亚单位和5个B亚单位，其中A亚单位是毒素的活性部分。B亚单位与肠粘膜上皮细胞表面的GM1神经节苷脂结合后，使A亚单位穿越细胞膜与腺苷环化酶作用，令胞内ATP转变为cAMP。胞质内cAMP水平增高后，导致肠粘膜细胞内的水、氯和碳酸氢钾等过度分泌到肠腔，同时钠的吸收减少，导致可持续几天的腹泻。LT-Ⅰ与霍乱肠毒素两者间的氨基酸的同源性达75%，他们的抗原高度交叉。
㈦ 微生物学常用的接种技术有哪些各有何特点
来源：检验星空
今天和大家一起对微生物检测中的一些基础操作进行汇总和梳理！
接种
将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。
接种和分离工具
接种针、接种环、接种钩、玻璃涂棒、接种圈、接种锄、小解剖刀。
常用的接种方法有以下几种：
1、划线接种
这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。
2、三点接种
在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。
3、穿刺接种
在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。
4、浇混接种
该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°c左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。
5、涂布接种
与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。
6、液体接种
从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。
7、注射接种
该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。
8、活体接种
活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。
注：所有接种必须无菌操作
培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。
(1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞。
分离纯化
含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物（mixed culture）。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（pureculture）。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。
1、倾注平板法
首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40-50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。
2、涂布平板法
首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。
3、平板划线法
最简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，最后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。
4、富集培养法
富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。
5、厌氧法
在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把这支试管放在沸水0浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。然后快速冷却，并进行接种。接种后，加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与空气隔绝。另一种方法是，在接种后，利用n2或co2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。
6、单细胞（或单孢子）分离法
是采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。较大的微生物，可采用毛细管提取单个个体。个体相对较小的微生物，需采用显微操作仪，在显微镜下用毛细管或显微针、钩、环等挑取单个微生物细胞或孢子以获得纯培养。单细胞分离法对操作技术有比较高的要求。
培养
1、根据培养时是否需要氧气，可分为好氧培养和厌氧培养两大类。
好氧培养：也称“好气培养”。就是说这种微生物在培养时，需要有氧气加入，否则就不能生长良好。在实验室中，斜面培养是通过棉花塞从外界获得无菌的空气。三角烧瓶液体培养多数是通过摇床振荡，使外界的空气源源不断地进入瓶中。
厌氧培养：也称“厌气培养”。这类微生物在培养时，不需要氧气参加。在厌氧微生物的培养过程中，最重要的一点就是要除去培养基中的氧气。
2、根据培养基的物理状态，可分为固体培养和液体培养两大类。
固质培养：是将菌种接至疏松而富有营养的固体培养基中，在合适的条件下进行微生物培养的方法。
液体培养：在实验中，通过液体培养可以使微生物迅速繁殖，获得大量的培养物，在一定条件下，还是微生物选择增菌的有效方法。
常规鉴定技术
1、形态结构和培养特性观察
（1）微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。
（2）细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落（colony）。不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。以此可以对不同微生物加以区别鉴定。因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要内容。
2、生理生化试验
微生物生化反应：指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。
微生物检验中常用的生化反应有：
（1）糖酵解试验
不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。
（2）淀粉水解试验
某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
（3）v-p试验
某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称v－p（+）反应。
（4）甲基红（methyl red）试验
肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基ph值下降至ph4.5以下，使甲基红指示剂变红。
（5）靛基质（imdole）试验
某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。
（6）硝酸盐（nitrate）还原试验
有些细菌具有还原硝酸盐的能力，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨或氮气等。亚硝酸盐的存在可用硝酸试剂检验。
（7）明胶（gelatin）液化试验
有些细菌具有明胶酶（亦称类蛋白水解酶），能将明胶先水解为多肽，又进一步水解为氨基酸，失去凝胶性质而液化。
（8）尿素酶（urease）试验
有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适ph为7.0。
（9）氧化酶（oxidase）试验
氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素c氧化，然后此氧化型细胞色素c再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。
（10）硫化氢（H2S）试验
有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。
（11）三糖铁（TSI）琼脂试验
（12）硫化氢-靛基质-动力（sim）琼脂试验
3、化学成分分析
微生物保藏
基本原理是在挑选优良纯培养物并使其处于休眠状态基础上，人为地创造一个有利于休眠的环境，使其长期保存后仍能保持菌种原有的优良特性。基本措施是低温、真空、干燥。
保藏方法：
1、定期移植法
亦称传代培养保藏法，指将菌种接种于适宜的斜面培养基上，最适条件下培养，完成培养于4～6℃进行保存并间隔一定时间（3-6个月）进行移植培养的一种短期菌种保藏方法。
2、液体石蜡法
指将菌种接种在适宜的斜面培养基上，最适条件下培养好后注入灭菌的液体石蜡，使其覆盖整个斜面，再直立放置于低温（4～6℃）干燥处进行保存的一种菌种保藏方法。
3、真空冷冻干燥法
指将保藏的菌种细胞或孢子悬浮于保护剂中，经预冻后在真空条件下使水分升华，再经真空封存后保存的一种长期菌种保存方法。
4、-80℃低温冻结法
将菌种悬浮于保护剂中，在－80℃冰箱中冻结保存的一种长期菌种保藏方法。
5、液氮超低温冻结法
指悬浮于保护剂中的菌种经程控降温后，移置于－196℃的液氮或－150℃左右的液氮气相中保存的一种长期菌种保藏方法。
㈧ 寻求微生物实验基本操作知识
这是薛泉宏微生物学课的精品课堂网站：里面有课件等资料，但没有教材，遗憾
http://netc.nwsuaf.e.cn/jingpin/2003/wsw/index.htm
《微生物学》教学大纲
第一部分、有关本科程的说明
1、本课程的性质和任务
微生物学是现代生物学科的先头学科,是科学技术现代化和农业现代化的重要学科领域之一。就其学科性质而言。它又是一门实践性学科。因此,它既是高等农业院校有关专业的专业基础课又是专业技术课。生物技术、生物工程、微生物、农、植、园等专业的学生通过此门课程的学习,不仅要获得微生物学理论知识,还要掌握基本的微生物研究操作技术和生产工程技能。本课程要求有较好的生物学及生物化学基础,故应该在二年级下学期开设。据现代微生物学学科发展速度,本课程至少要保证60学时,考核方式除微生物基础知识的考试考查外,对微生物学的基本操作技术与技能进行实际考查。
2、本大纲的使用专业和学时数
讲授内容及要求（授课学时56、各专业可适当选择，实验课学时24、总学时80）
表1 讲述内容及学时数分配表
章节 讲述内容 学时数 备注
一 绪论 2
二 微生物形态学及代表分类 16
三 微生物营养、呼吸、生长及生态系 14
四 微生物的代谢和发酵 4
五 微生物遗传与变异 6
六 微生物分类与鉴定 4
七 微生物在自然界物质转化中的作用 6
八 应用微生物 4
九 微生物实验（内容附后） 24
3、本门课程与其他课程的联系与分工
微生物学是现代生物学科的先头学科,是科学技术现代化和农业现代化的重要学科领域之一，它既是高等农业院校有关专业的专业基础课又是专业技术课。本课程要求有较好的生物学及生物化学基础,该课程是微生物专业、生物技术专业的专业课,也是该专业及其他相关专业的专业基础课，如《发酵微生物》、《微生物遗传》、《酶工程》、《发酵工程》、《病理学》、《分子生物学》等。
4、主要教学方法与媒体要求
《微生物学》课程以课堂教授为主，同时结合电化手段如多媒体显微动画演示、幻灯片、教学挂图等进行辅助教学。微生物实验是微生物教学的重要环节，它是对课堂讲授的内容的印证和微生物操作技术的培养与训练,对直观理解课堂教授内容具有重要的作用。
5、主要参考书目
薛泉宏主编的《微生物学》，西安：世界图书出版公司，2000
周德庆主编的《微生物学教程》，北京：复旦大学出版社，1987
程丽娟、薛泉宏主编的《微生物学实验指导》，西安：世界图书出版公司，2000等。
第二部分、课程内容说明（基本知识点、重点和难点）
一、绪论
1、目的 启迪学生为国争光,激发学生对微生物学的浓厚兴趣;鼓励学生勇于实践,勤于思考为科学发展做出奉献。
2、内容 微生物学研究对象;微生物学分科;本课程的任务;微生物学发展史与发展趋势。
3、方法 放录相(微生物学发展史)。重点讲授;我国祖先对微生物学的贡献和现代微生物学发展趋势。
4、学时 2学时。
二、微生物形态学及代表类群
1、目的 掌握原核、真核,与非细胞微生物的基本形态结构,繁殖方式,各类微生物主要区别，了解微生物分类原则、系统。该章为本门课程的重点。
2、内容
(1)原核微生物
a、原核微生物的主要特征；
b、细菌形态大小;细胞基本结构;特殊结构;内含物;原生质;细菌运动;繁殖;个体与群体形态等。
c、放线菌 形态特征;繁殖方式;代表属种。
d、兰细菌和其它原核微生物 立克次体,衣原体,枝原体和类菌质体（可自学）。
e、细菌分类系统（可自学）。
(2)真核微生物-真菌
a、真菌的细胞结构
b、霉菌 形态特征;菌丝变态、菌丝组织体;繁殖(无性和有性繁殖、无性与有性孢子)农业上常见霉菌。
c、酵母 形态特征;繁殖;常见酵母属种。
d、大型食用与药用真菌 形态特征与生活史;常见食用与药用真菌简介。
e、真菌分类系统（可自学）。
(3)非细胞生物-病毒
a、病毒 形态、大小与结构;类别与分类(昆虫病毒、植物病毒、分类与命名原则)
b、噬菌体 形态结构;烈性和温和噬菌体的侵染过程;溶原现象。
c、一步生长曲线。
d、类病毒（自学）。
3、方法 重点讲授,辅课堂讨论(着重各类微生物的区别)。
4、学时 16学时。
三、微生物营养、呼吸、生长和生态系
1、目的 学习微生物生理基础知识,微生物营养类型;微生物呼吸与能量代谢;微生物生长发育与环境条件;微生物培养基配制原则和方法等,从而掌握微生物工作的基本原理。该章为本门课程的重点。
2、内容
(1)微生物的营养
a、细胞的化学组成
b、营养源及其生理作用
c、营养物质的吸收
d、微生物的营养类型
e、培养基(制备原则与方法原理、类型)
(2)呼吸与生长
a、能量代谢 (ATP的光合磷酸化和氧化磷酸化、ATP的利用效率)
b、呼吸类型 (有氧呼吸、无氧呼吸与发酵)
c、微生物与氧的关系 (好气性微生物、嫌气性微生物和兼性厌气性微生物)
d、生长 (群体生长,生物量,生长曲线,世代时间和连续培养)
e、环境条件对微生物生长的影响
(3)生态系
土壤-微生物生态系;植物-微生物生态系;微生物与微生物的关系;空气和水域微生物生态系;
3、方法 重点讲授:营养类型、呼吸与能量代谢;辅以课堂讨论 (培养基制备与环境条件,灭菌与消毒方法)
4、学时 14学时。
四、微生物的代谢和发酵
1、目的 简略了解微生物分解代谢和合成代谢及相互关系；微生物独特合成代谢途径；微生物代谢调控与发酵生产。
2、内容
a、 微生物分解代谢和合成代谢及相互关系
b、微生物独特合成代谢途径
c、微生物代谢调控与发酵生产。
3、学时 4学时。
五、微生物遗传变异与育种
1、目的 简略介绍微生物遗传变异及有关遗传学概念以使学生深入学习及提高打基础。掌握基因突变现象和原因，菌种保藏的原理及常用方法。
2、内容
a、突变和诱变育种；b、基因重组和基因工程；c、菌种退化、复化和保藏
3、学时 6学时。
六、微生物分类和鉴定
1、目的 介绍微生物通用分类单元以及微生物在生物界的地位，介绍微生物的经典分类及现代分类方法，并辅助介绍血清学反应有关内容。
2、内容
a、微生物通用分类单元
b、微生物在生物界的地位
c、微生物的经典分类及现代分类方法
e、传染与免疫及血清学反应特征
3、学时 4学时。
七、微生物在自然界物质转化中的作用
1、目的 着重掌握微生物在自然界物质循环中的积极作用;植物残体的微生物转化过程,了解微生物在土壤肥力中的重要性。
2、内容
(1)植物残体的约略分析
(2)自然界碳素的生物循环
a、不含氮有机物的有氧降解
b、酒精发酵,乳酸发酵,丁酸发酵,甲烷发酵及其主要微生物
c、纤维素与果胶物质分解
(3)自然界的氮素生物循环
a、含氮有机物的氨化作用b、硝化作用c、硝酸还原与脱氮作用d、生物固氮作用
3、方法:自学为主,重点讲授:辅以答疑。
4、学时 6学时(讲授4学时,讨论与答疑2学时)。
八、应用微生物
1、目的 学习食用菌与微生物农药的生产过程,加强实践活动培养微生物工作操作技术与能力。
2、内容
(1)食用菌生产
(2)微生物农药生产使用
(3)沼气发酵
3、方法 自学为主,辅以讨论答疑,配合放录相(凤尾菇栽培等)
4、学时 4学时
九、实验安排
本课程的实验,包括对课堂讲授的内容的印证和微生物操作技术的培养与训练,后者为重点。因而在实验安排上具有较强的独立性。它要以培养微生物工作的基本修养,建立无菌观念,掌握无菌操作技术,熟悉显微镜使用原理和方法并具有初步的微生物工作和生产技能为主要目的。
实验一 3学时
1、显微镜使用 (放录相)
2、油镜的使用及细菌形态观察
3、环境中微生物检测 (由结果中分辨真,细,放,各类微生物菌落)
实验报告:要求绘出细菌形态图
实验二 3学时
1、细菌运动性观察(电视)
2、无菌操作演示(试管斜面接种)
3、细菌简单染色与革兰氏染色
实验报告;绘出细菌形态图并注明染色结果
实验三 3学时
1、荚膜与鞭毛观察(电视)
2、芽孢与伴孢晶体染色(要求无菌操作)
实验报告:绘出芽孢与伴孢晶体显微镜视野图
实验四 3学时
1、昆虫病毒多角体观察(电视)
2、放线菌形态观察(菌落与制片观察)
3、真菌形态观察(菌落与制片观察)
实验报告:绘出显微镜观察视野图
实验五 3学时
1、显微镜直接测数
2、细菌大小测定
实验报告:列出实验测定结果
实验六 3学时
1、培养基制备
2、灭菌与消毒
为分离培养准备条件
实验七 3学时
1、细菌培养技术(录相)
2、微生物的分离培养与纯化(含测数)
3、拮抗试验或抗生素抑菌测验
实验报告:写出试验结果并辨认各类微生物菌落形态
实验八 3学时
1、酒精发酵
2、乳酸发酵
实验报告:写出发酵原理并分析实验结果
注:以上实验据各专业可以调整。