1. 贵州男童误吞123颗磁珠紧急送医，经过治疗孩子的情况如何了
经过治疗后，孩子生命体征平稳，正在儿童重症监护室里接受观察。那么，孩子是怎么将123颗磁珠吃进肚子里的呢？事件的大概是这样的，孩子的父亲吴师傅在网上看到这个磁珠，说是能开发孩子的智力，然后吴师傅就给孩子买来玩了，现在被孩子误食了也还后悔莫及啊。
如果不及时的取出磁珠，这对孩子的影响会超级大，甚至会因此丧命，还好这位孩子是幸运的，所以，家长们还是不要给孩子玩太过于危险的物品，孩子还小，没有自主辨别的能力，很容易造成孩子的误食，如果给孩子玩，一定要在家长的陪伴下，这样家长能够顾着孩子。其实每年因为孩子误食东西而丧命的例子还有很多，每次看到这样的新闻，我都觉得很心痛。最后，希望这位孩子能够早日恢复健康。
2. 近视眼怎么恢复
目前治疗假性近视的方法很多，主要是放松调节，达到治假防真目的。常用的方法有：(1)放松调节；①散瞳疗法：应用睫状肌麻痹剂散瞳，目前眼药水点眼每日1次。②戴凸透镜法：先让病人戴一个较高度数的凸透镜，注视5米远的视力表，使睫状肌放松，然后调整凸透镜的度数，使视力达到基本正常为止。③远眺法：在学习或写字1～2个小时后远眺大自然景色，使睫状肌调节松弛。坚持做眼保健操每日3～4次。
(2)采用提高视觉中枢的兴奋性，改善视觉功能的方法： 直流电治疗近视眼，耳针，梅花针，穴位按摩，穴位导电，气功疗法和冷水浴疗法等。主要是增加大脑的视中枢及视神经细胞的兴奋性，可使远近视力均有提高。(3)改善学习环境：阅读和写字注意保持30厘米距离和正确的姿势。注意自然光线和保证室内充足的照明。劳逸结合，改掉不良的学习习惯，每阅读1小时应休息10～15分钟，不要躺着或走路看书。注意加强体育锻炼。
由于假性近视是随着看近时间的延长和调节度的增加而加重，随着看远和调节放松的程度而减轻或消失，所以假性近视具有治则消、不治又可复发的特点。采取多种方法治疗都可能有一定的效果，但都不能持久。因此教育青少年儿童从小养成保护视力的习惯，避免眼睫状肌调节过度而持续紧张，事预防发生近视眼的关键。
穴位按摩疗法，也就是眼保健操，它是根据造成近视眼的原因，综合祖国针灸医学、经络、穴位按摩等方法设计而成的。主要是对晴明、攒竹、太阳、风池、四白等穴位进行按摩，通过按摩穴位，疏通经络，调和气血，使眼部调节痉挛和集合紧张得以缓解，达到治疗和预防近视之作用。
针灸疗法，是选用太阳、攒竹、承泣等穴位并配合风池，翳明等穴位进行针灸，每次选用1-2个主穴及配穴，每日一次，20-30天为一疗程。
电刺激疗法：选用以上穴位，连接电刺激治疗仪，进行间断或连续性电刺激，每日一次，每次10-15分钟。12次为一疗程。
扩瞳药物治疗：方法是用1%阿托品或2%后马托品眼液点眼，一日一次，连续三天。这类药物可使睫状肌麻痹，因而对假性近视有明显的治疗效果。
解痉药物治疗：目前有人主张用0.25%双星明眼液，每日滴眼一次，这类药物主要是使睫状肌痉挛放松，从而达到治疗近视的目的，但疗效较慢。
雾视法：又分为远雾视和近雾视两种。A、近雾视法：是用+1.0-+1.5D的凸透镜，在看书写字时配戴，可减少看近的过度调节。B、远雾视法：是用+3.0D的凸透镜注视远处，让眼调节充分放松。
利用近视治疗仪中图像距离的远近变换，锻炼睫状肌的功能，以增强眼睛的调节机能。
其他还有理疗、如磁珠的耳穴压理，耳针、气功疗法等，这些方法主要是由于提高了视中枢及视神经细胞的兴奋性，近期内可有提高视力的作用。
1、药物治疗是应用最广的一种
放松调节的方法。在临床上最常见的是阿托品等散瞳类药物，它可使睫状肌麻痹，从而解除假性近视的调节痉挛，因此具有明显的治疗效果。但在使用这类药物时，会引起程度不同的看近困难，因而使用后儿童看书写字等近距离用眼时会有所不便，而药物作用消失后，近距离用眼时假性近视又可复发。因此，儿童近距离用眼后，或晚上睡觉前使用这类药物，常用的药物是双星明滴眼液。
2、利用看远放松调节。这类方法有远眺、云雾法、眼保健操等。由于简单方便、符合视觉生理要求，这类方法已被广泛使用。云雾法的具体方法为：戴+3.00度的凸透镜注视远方15分钟，每日2次，通过戴凸透镜，使睫状肌放松调节，这与真性近视戴凹透镜的作用完全不同。
眼保健操通过对眼睛周围有关穴位的按摩刺激，增强眼部周围的血液循环，改善眼部的神经营养，使眼部疲劳的肌肉得以放松。
3、提高视中枢的兴奋性，改善视觉功能。这类方法有中药、针刺穴位导电、气功疗法、整骨梳筋等。它们可以在近期内提高视力，主要是通过增加中枢和视神经细胞的兴奋性。
另外，还有一些方法，如药物与穴位按摩结合，以及一些理疗仪治疗，都是综合这两方面的机理，达到提高视力的目的。
1、切忌“目不转睛”，自行注意频密并完整的眨眼动作，经常眨眼可减少眼球暴露于空气中的时间，避免泪液蒸发。
2、不吹太久的空调， 避免座位上有气流吹过，并在座位附近放置茶水，以增加周边的湿度。
3、多吃各种水果，特别是柑桔类水果，还应多吃绿色蔬菜、粮食、鱼和鸡蛋。多喝水对减轻眼睛干燥也有帮助。
4、保持良好的生活习惯，睡眠充足，不熬夜。
5、避免长时间连续操作电脑，注意中间休息，通常连续操作1小时，休息5—10分钟。休息时可以看远处或做眼保健操。
6、保持良好的工作姿势。保持一个最适当的姿势，使双眼平视或轻度向下注视荧光屏，这样可使颈部肌肉轻松，并使眼球暴露于空气中的面积减小到最低。
7、调整荧光屏距离位置。建议距离为50—70厘米，而荧光屏应略低于眼水平位置10—20厘米，呈15—20度的下视角。因为角度及距离能降低对屈光的需求，减少眼球疲劳的几率。
如果你本来泪水分泌较少，眼睛容易干涩，在电脑前就不适合使用隐形眼镜，要戴框架眼镜。在电脑前佩戴隐形眼镜的人，也最好使用透氧程度高的品种。如果出现眼睛发红，有灼伤或有异物感，眼皮沉重，看东西模糊，甚至出现眼球胀痛或头痛，休息后仍无明显好转，那就需要上医院了。如何更好地预防青少年近视阿满强调五点，一要注意用眼卫生，不能用眼过度；二要坚持做眼保健操，通过按摩穴位增强眼眶的血液循环，消除眼疲劳；三要劳逸结合，睡眠充足；四是注意营养，加强锻炼；五是请经验丰富的验配师检测视力，发现视力减退应及时戴镜矫正并不断增强爱眼意识。
3. 磁珠可以过安检吗
可以
儿童磁力珠的话是能够过地铁的安检的,因为目前熬夜的话,根据现阶段我国的这一个交通铁路法则相关规定来说的话
4. 儿子把三个小铁磁珠吞进肚子里去怎么办
如果是磁珠带有磁性的而且又同时吞了三个下去，这个就比较麻烦，因为像这样的有可能会在移动过程中因为相互吸合而贴在肠道上。这样就有可能堵塞肠道。长时间吸附在肠道一处也有可能会导致病变。建议这样的情况要尽快去医院照照，看看现在磁铁在肚子里的情况。
如果是带磁性但是只吞了一个下去，这个就不用担心了，同第一条一样的。因为我小孩前一段时间也是吞了一个磁铁下去，是那种玩具围棋子，过了差不多5天才拉出来。
5. 跪求请问谁知道大肠杆菌在保健食品中的标准值是多少我可以向那里咨询
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大肠杆菌O157: H7实验 诊断研究进展
大肠杆菌O157: H7感染临床表现
出血性肠炎：鲜血样便，腹部痉挛性疼痛，低热或不发热。
溶血性尿毒综合征（HUS）：主要发生在儿童，常出现在腹泻后数天或1-2周。病死率一般在10%，各别可高达50%。
血栓性血小板减少性紫癜（TTP）：主要发生在成年人，尤其老年人。病人主要表现为发热、血小板减少、溶血性贫血、肾功能异常等症状，病情发展迅速，病死率高，有时可出现70%的病人死亡。
大肠杆菌O157: H7传染源和传播途经
大肠杆菌O157: H7基本上是一种食源性病原菌，可通过食用大肠杆菌O157: H7污染的牛肉、牛奶、牛肉或制品、鸡肉、蔬菜、水果、饮料、水等感染,也可通过人与人、人与动物密切接触传播。
在实验室，大肠杆菌O157: H7可以感染小鼠、鸡、兔、猪、牛等动物。
大肠杆菌O157: H7的感染已成为世界性的问题
我国情况也不容乐观
一、细菌培养与鉴定
1．分离培养
早期培养对确定病原有重要意义。
培养的对象首先是急性血性腹泻患者，其次是HUS、TTP等住院病人，再其次是高危接触者。
培养基：
山梨醇麦康凯琼脂、胰胨大豆琼脂
改良的伊红美兰 、改良的SD-39（MSD）琼脂
添加了头孢克肟 和 亚碲酸钾的山梨醇麦康凯琼脂（TC-SMAC）
添加了头孢克肟和鼠李糖（0.5%)的山梨醇麦康凯琼脂（CR-SMAC）
“科玛嘉”大肠杆菌O157: H7显色培养基
四溴荧光亚甲基兰琼脂
H7抗血清—山梨醇发酵培养基
增菌液：
含10mg/L 新生霉素的EB肉汤或肠道增菌液
含10mg/L 新生霉素或10mg/L盐酸-吖啶黄的胰蛋白胨大豆肉汤
新生霉素MEC肉汤
月桂基胰蛋白胨肉汤
加入下例任何一种抑制剂均可增加培养基的选择性
头孢克肟 0.05mg/L 亚碲酸钾2.5mg/L
新生霉素10mg/L 万古霉素40mg/L
2．免疫磁珠分离法
免疫磁珠分离法是将特异性抗体吸附于一种能被吸附的磁性珠子上,然后利用抗原抗体反应特性将样品中的大肠杆菌O157: H7富集起来。
方法:1.增菌;2.取样品1ml加大肠杆菌O157: H7免疫磁珠20ul;3.轻轻混合10分钟;4.将试管插入磁架上;5.吸取上清;6.加PBS,重复3-5过程;7.取管壁沉淀物,划线接种于CT-山梨醇麦康凯琼脂(C-头孢克肟,T-亚碲酸钾)等选择性培养基。37℃培养6-24小时，挑取可疑菌落进行鉴定。
Chapman等 共检测大便标本690份, 免疫磁珠分离法检出25 。用免疫磁珠分离法分离的l2株大肠杆菌O157: H7中,直接培养阳性仅5株。
Wright等将接种大肠杆菌O157: H7的碎牛肉标本置加有万古霉素和头孢克肟的缓冲蛋白胨水培养,然后直接或用大肠杆菌O157抗体包被的磁珠分离细菌后,接种于CT-SMAC,结果直接次培养检出量为200cfu/g,而免疫磁珠分离法仅需 2cfu/g 。
Chapman等先用EC肉汤增菌,然后用免疫磁珠分离法富集牛粪便大肠杆菌O157: H7菌株,再用选择性培养基分离，并与CR-SMAC和CT-MAC直接培养作比较。用前者检测接种12株不同大肠杆菌O157: H7菌株的牛粪便悬液,其敏感性比在两种培养基上直接培养高100倍。
Cubbon等用免疫磁分离法（IMS）检测牛粪便和食品标本的大肠杆菌O157: H7。在一起经牛奶传播的大肠杆菌O157: H7爆发中,用IMS、粪便培养和多聚酶链反应(PCR)检测Vero毒素基因的携带,用三种方法对粪便大肠杆菌O157: H7的分离率作比较结果,在受检的142份粪便标本中,直接培养和IMS均阳性20 份,另13份仅IMS阳性。因此,IMS提高了大肠杆菌O157: H7感染病例的检出率,与PCR符合率高。
目前，污染的肉、家畜，甚至饮用水均面临大肠杆菌O157: H7的卫生威胁。检测食品和水源中肠道病原体使用传统的培养法,结果不理想。IMS和其它检测的研究表明,对快速检测食品和环境标本似乎前景良好,Yu检等以IMS结合电化学发光检测法(ECL)检测食品和污染物中的大肠杆菌。结果显示,在原缓冲液检出大肠肠菌的范固为100－1000 cfu/lm,在食品检出的范围为1000－2000cfu/lm ，检测时间十分快,一般不到1小时。菌O157: H7菌株的牛粪便悬液,其敏感性比在两种培养基上直接培养高100倍。在监测牛群的4个月间,从牛采集1024份直肠标本,其中检出大肠杆菌O157: H784份（8.2%）84份中有23份（27.4%）由直接培养和IMS分离。23份中15份由两种培养基、5份仅由CT-SMAC、3份仅由CR－SMAC分离,其余61份(72.6%)仅IMS分离。用含吐温－20 的PBS洗涤磁珠可减少其它微生物与磁珠的非特异性结合。用无关的抗体包被磁,则大肠杆菌O157: H7不结合。IMS具有快速、操作简单、特异性高,在流行病学调查中有价值。
3．生化反应
目前许多国家使用的O157和 H7特异性抗体与极少数细菌具有不同程度交叉反应。因此用生化试验确定为大肠杆菌是必须的。
典型大肠杆菌的主要生化反应结果如下：
动力试验（+） 葡萄糖（+） 麦芽糖（+）甘露醇（+） 蔗糖（－/+） 硫化氢（－） 尿素（－） 靛基质（+） 甲基红（+） V-P试验（－）枸橼酸盐（－）苯丙氨酸脱羧酶（－）赖氨酸脱羧酶（+/－）鸟氨酸脱羧酶（ +/ －）氧化酶（－）氰化钾（－）
与O157有鉴别意义的生化反应见表1。
MUG即4-甲基伞形化内酯-β-葡萄糖醛酸苷。大多数大肠杆菌具有葡萄糖醛酸酶,可水解MUG产生荧光, 但O157: H7中大多数菌株则不水解MUG。Thompson等建立了一种快速MUG试验,取 MUG试剂0.5ml置试管中,以无菌棉签挑取待检菌纯培养物混匀于其中,44.5℃置20min,暗室内高强度光源下观察结果,产生蓝色荧光者为阳性。
二．血清学检测
1．玻片凝集试验
2. 胶体金免疫技术
3. ELISA
4．免疫荧光技术
5．胶乳凝集
6. 间接血凝分析(IEHA)
7. 全自动抗原抗体检测系统
8. 免疫印记法
1．玻片凝集试验
玻片凝集试验是鉴定O抗原最经典的方法,实验中如果凝集反应不明确，但根据临床表现和生化反应等菌株高度可疑时,可100℃加热菌液30min再行玻片凝集试验。这样可去除K抗原的影响。为排除交叉反应引起的凝集造成假阳性,应继而做试管凝集反应,所测得的效价不应低于诊断血清原标定效价的一半。鉴定H抗原也应同时做玻片和试管凝集试验,并应先对待检菌做动力试验,在动力活泼时取培养物做H抗原鉴定。
2. 胶体金免疫技术
胶体金免疫技术特点是以胶体金作为标记物进行的抗原抗体反应。这一技术最初用于免疫电镜技术。至今，在免疫测定中，金标记常与膜载体配合，形成特定模式，典型的如斑点免疫渗滤试验和斑点免疫层析试验等，已是目前应用广泛的一种简便、快速的血清学检验方法。
胶体金的制备多采用还原法，氯金酸是主要还原材料。金颗粒的大小取决于制备时加入的柠檬酸三钠的量。
胶体金免疫层析试验时以硝酸纤维膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，犹如层析一样。
中国预防医学科学院微生物研究所利用胶体金技术、双抗体夹心法和显色反应等特点，研制了大肠杆菌O157: H7病原体快检金卡，通用于定性检测粪便、食品、水等样品中的O157: H7大肠杆菌。显色程度与样品中细菌含量成正比，最低测菌量为少于100个菌细胞，主要特点是敏感性高，可用于待检样品初筛，阳性样品可进行细菌分离，减少工作量。
3. ELISA
大肠杆菌O157: H7的常用检测方法是粪便培养后作细菌分离,然后用生物化学和免疫学方法鉴定,一般需72 小时。
Dylla等用一种快速ELISA直接检测粪便中大肠杆菌O157: H7,并与标准培养方法加以对照。结果显示,ELISA检测183份粪便标本,检出大肠杆菌O157: H7 9份。常规培养法阴性176份,而ELISA阴性174份。总特异性为98.9%。该法与其它非O157: H7大肠杆菌无交叉反应,是一种准确、敏感、特异、易观察结果的筛选方法，尤其适用于中、小实验室及大量粪便标本的流行病学调查。
Padhye等用单克隆抗体进行直接ELISA反应检测O157: H7,除O26 ：H11外，未发现与沙门氏菌、结肠炎耶氏森菌、志贺氏菌和肺炎克雷伯民菌等有交叉反应。单克隆抗体用于检测大肠杆菌O157: H7有明显特异性，可作为一种免疫试剂用于临床和食物标本的快速检测。Clark 等近一步对单克隆抗体的研究发现,此种单克隆抗体识别的物质是LPS,这种LPS抗原决定簇用全细胞ELISA同样可以在其它血清型大肠杆菌和产生或不产生Vero毒素的大肠杆菌中检测到, 而且易受到胆盐、吖啶黄和温度的影响,但可以通过结合免疫捕获的修饰方案来提高ELISA的特异性。
4．免疫荧光技术
DEFT 与Ab-DEFT：
直接荧光技术（DEFT）与抗体定位荧光技术(Ab－DEFT)的主要特点是,显微镜下直接计数样品菌细胞。由于无需培养或分离过程,因此检测非常快速。DEFT的基本原理为:对样品进行过滤,用荧光染料(如吖啶橙)对留在滤膜上的菌细胞染色后,用荧光显微镜观察计数。但由于荧光染料的非特异染色,不但被检菌被染色,本底杂菌也可染色,从而影响了结果的精确性。Ab-DEFT则克服了这一缺点,过滤后的菌细胞与荧光标记的特异抗体作用,然后用荧光显微镜观察计数。
固相荧光毛细管免疫分析
此方法高度敏感，具有快速、试剂用量少、易于操作等优点。Czajlu等用热杀死的O157: H7菌包被玻璃毛细管作固形支持物。
样品中加入结合了生物素的O157: H7多克隆抗体,作用一段时间,然后将此样品/抗体混合物与标记了Cy5 (一种荧光花青染料)的亲和素加入到毛细管,孵育2min,冲洗、吹干,由激光传感器系统发射650nm波长激发光激发花青染料,之后用光学传感器系统测定荧光发射密度。
直接免疫荧光抗体染色
Park等对粪便样品进行离心后,用免疫荧光抗体对粪便涂片进行标记,可检测到所有培养法证实的菌株,检测时间<2h。
5．胶乳凝集
该方法是以胶乳颗粒作载体,以O157: H7特异性抗体致敏,制成特异的胶乳试剂,将标本乳化于玻片或有色烧盘上，滴加胶乳试剂,呈明显凝集而对照胶乳不凝集时即为阳性。
6．间接血凝分析(IEHA)
该法多用于对LPS、可溶性本体抗原、未加热抗原的抗体检测,对检测H抗原的抗体效果不佳。Morooka等检测了溶血性尿毒综合征(HUS)病人血清LPS抗体,虽然甲醛化羊红细胞(SRBC)有低水平非特异性吸附,但不影响该方法作为一种有效、快速（<3h）的诊断方法。因为感染病人血清的滴度明显高于非特异性吸附。
7. 全自动抗原抗体检测系统
VIDAS是一种全自动抗原抗体检测系统。可直接从感染性疾病患者标本中检测细菌、病毒、弓形虫、衣原体和螺旋体等微生物的抗原、抗体或毒素。
基本原理：采用酶联免疫（夹心法）原理，并在底物中掺入荧光物质，最终产生荧光产物4-甲基-7-羟刀豆素，荧光强弱与标本中被测物浓度相关，经扫描样本读数与标准比较计算出标准值，并根据阴性和阳性临界值判定结果。
8.免疫印记法
目的是检测大肠杆菌O157: H7感染者血清中的O157脂多糖和溶血素特异性 抗体。基本原理是将提纯的脂多糖或溶血素用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离后，通过转移电泳转移到硝酸纤维膜上，然后用抗原抗体进行免疫检测。包括SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、转移电泳、免疫检测三部分。
特点是具有比较高的特异性和敏感性 。
免疫检测
将封闭好的硝酸纤维素膜按梳子齿的宽度剪成每一个泳道一条，依次编号。
1) 每条加入1毫升用PBS稀释的病人血清，室温震荡2小时，同时设阳性对照和阴性对照；
2) 用2.5毫升／条PBST震荡洗涤3次，每次5分钟；
3) 加入用1毫升用PBS稀释的II抗，室温震荡1小时；
4) 用2.5毫升／条PBST震荡洗涤2次，每次5分钟，再用PBS洗涤一次；
5) 将膜放入12毫升显色液中显色，室温震荡15-30分钟，至阳性对照出现满意的蓝紫色 ；
6) 将膜放入蒸馏水中终止显色反应，照相；
7) 当显色的条带和溶血素的分子量或0157脂多糖的条谱一致时，结果判断为阳性。
二．分子生物学检测
分子生物学的出现，为更快诊断微生物提供了许多分子学工具。 这一新的研究是用基因型而不是表型因子来鉴定特异性病原体。因此其特异性更好。加之 操作程序自动化使得DNA分析在实验室应用中已成为常规操作。自动化DNA提取仪，聚合酶链式反应仪(PCR仪)，DNA序列分析仪，脉冲凝胶电泳仪(用于分离DNA大片段，如完整的染色体) 在疾病诊断中都是很有用的。
1．DNA探针
探针(probe)标记：放射性核素 、非放射性物质标记 。
探针的来源 ：①克隆的基因组DNA探针；②cDNA探针；⑧RNA探针；④寡核苷酸探针。
标本处理：根据标本来源和量的不同而处理不同 。
杂交方法：斑点杂交 、southern印迹 、原位杂交 、Northern印迹 等。
杂交信号检测 ： (1)测量放射性核素射线脉冲数 (2)放射自显影 (3)显色法 (4)发光法。
O157: H7特异噬菌体上的sltⅠ、Ⅱ基因、大质粒溶血素基因及染色体上eae基因等都已制成了可杂交检测的特异探针。Beutin等曾用VT1(750bp,)、VT2(850bp)、溶血素(3.4kb)等探针进行流行病学调查。Thomas等用地高辛标记的VT2B亚单位基因、VT2C基因探针检测不同噬菌体型O157: H7菌。Huck等筛选了O157: H7大质粒上限制性片段,发展了一种2.0kb的Sma I片段探针,认为此探针对O157: H7血清型最为特异,可与所有O157: H7试验菌杂交。
2. PCR技术
聚合酶链式反应技术（PCR）是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法。具有特异性强、敏感性高、快速、简便、可扩增RNA或cDNA、对起始材料质量要求低等优点。
PCR技术扩增体系的基本成分
引物: PCR产物的特异性主要取决于引物链的特异性。由于存在同源序列，随意设计的引物链，其PCR产物在电泳分析时可能出现多条链，因此在设计引物链时应充分考虑引物特异性。引物长度一般为15-30个碱基,G+C含量为40- 60%,浓度0.1-1umol/L 。
TaqDNA聚合酶：浓度为1-4ul/100ul。TaqDNA聚合酶单位用量增长可能导致非特异DNA扩增 。
模板DNA：应避免混有任何蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制剂及能结合DNA的蛋白酶。DNA摸板的制备方法有加热法、冻溶法、超声波粉碎法、碱变性法、SDS裂解法等多种。
4×dNTPs ： dNTP储存液pH应为7.0，在反应体系中，4种dNTP的浓度应相同，每种dNTP的浓度以50-200 umol/L为宜。
缓冲液及其他成份：PCR反应体系中，一般采用Tris-HCl缓冲液。适宜的Mg2+浓度为高于dNTP总浓度0.2-2.5 mmol/L。
PCR技术循环参数
PCR扩增是由变性、退火和延伸三个步骤反复循环而实现的。确定正确的循环参数是PCR成功的保证。
循环参数
1．变性温度和时间
模板DNA和PCR产物的变性不完全，是PCR反应失败最常见的一个原因,在变性步骤，使温度达到双链DNA完全分离的变性条件是95 ℃ ，30s。对GC含量高的靶DNA序列，宜用较高的变性温度。在解链温度下，DNA的变性仅需几秒。但是，使反应管内达到解链温度需要一定的时间。原则上变性步骤应高温、短时，即要保证变性充分，又要保持聚合酶在整个反应中的活性。
循环参数
2．引物退火
引物退火的温度和时间取决于引物的长度、碱基组成及其在反应体系中的浓度 。对GC含量约50％，长20个碱基的典型寡核苷酸引物而言，最佳的退火温度为55 ℃ 。在温度较高的条件下退火，可提高PCR的特异性。
循环参数
3．引物延伸 ：引物延伸是DNA聚合酶将脱氧单核苷酸逐一地加到引物的3’一OH末端，引物延伸温度取决于DNA聚合酶的最适温度。如用TaqDNA聚合酶，一般取70-75 ℃ ，常用72 ℃ 。 延伸步骤的时间则取决于目标序列的长度、浓度和延伸温度。目标序列越长、浓度越低、延伸温度越低，则所需的延伸时间越长；反之，目标序列越短、浓度越高、延伸温度越高，所需的延伸时间则越短 一般而言，每1000个碱基的序列，延伸时间1分钟便足够了。对于扩增100—300个碱基的短序列片段，可省去延伸温度这一步骤，而采用快速简便的变性、退火双温循环。这是因为TaqDNA聚合酶即使在退火温度下仍保持很强的活性，而延伸过程可在退火温度转变为变性温度的过程中完成。
循环参数
扩增产物长度 100bp 500bp 1000bp 2000bp
94℃变性时间（秒） 30 30 60 60
55℃复性时间（秒） 30 30 60 60
72℃延伸时间（秒） 30 38 120 180
一般作25-30个循环即可，进行最后一次循环时间、延伸时间增加5分钟。
PCR扩增产物的检测方法
PCR反应混合物经过循环扩增后，所需做的工作就是检测反应液中是否存在预期扩增产物及产物的特异性。目前已经发展了许多检测分析PCR扩增产物的方法。包括凝胶电泳、高压液相色谱、核酸探针杂交、探针捕获酶免疫分析、酶切图谱分析、单链构型多态性分析、核酸序列分析。
PCR技术类型
免疫PCR技术 原位PCR技术 不对称PCR技术
巢式PCR技术 反向PCR技术 逆转录PCR技术
复合PCR技术 彩色PCR技术 抗原捕获PCR技术
增敏PCR技术 酶标PCR技术 二温式PCR技术
锚定PCR技术 定量PCR技术 毛细管PCR技术
多重PCR技术 巢式或套式PCR技术
PCR技术在大肠杆菌O157: H7检测中的应用
(1)简单PCR： Meng等以eae基因5′末端附近一段688bp DNA片段为基础设计了一对引物,扩增产物为633bp的DNA片段。其退火温度为60℃－63℃, 应用煮沸法与基因释放法,大肠杆菌O157: H7检出限分别为25与38CFU/ml,检测时间为3h。
Thomas等用PCR扩增了slt基因片段。引物：
正链5′-(TTTACGATAGACTTCTCGAC)-3',
反链5′-（CACATATAAATTATTTCGCTC）-3’
其PCR产物由凝胶电泳测定,检测时间为ld 。
徐建国等根据O157: H7 特有的hlyA、B基因序列设计了PCR引物,产物为338bp。
PCR技术在大肠杆菌O157: H7检测中的应用
（2）多重PCR:由于鉴定O157: H7血清型不能仅仅依靠简单PCR,近年来国外学者对多重PCR方法在大肠杆菌O157: H7的诊断价值方面进行了研究。Meng等同时扩增了eae 上游基因片段、sitⅠ基因片段、sit Ⅱ基因片段,其长度分别为633、210、484bp。此引物设计可有效区别O157: H7血清型与O55: H7、O55: NM。Fratamico等在一个单一反应中同时扩增了eae基因、slt Ⅰ、Ⅱ的保守序列及60MDa质粒保守序列,其产物分别为1087、227、224、166bp。严笠选用针对大肠杆菌O157: H7志贺样毒素Ⅰ、Ⅱ（SLT－Ⅰ、SLT－Ⅱ）和溶血素（Hly）基因的三对引物,在同一扩增体系中进行PCR,检测12株不同来源的O157: H7大肠杆菌及其它致病性大肠杆菌及沙门菌、志贺菌15株。结果复合PCR方法较单一PCR方法具有较高的特异性，12株O157: H7取得了稳定、可靠的阳性结果。能迅速、有效地与其它致病性大肠杆菌及沙门氏菌、志贺菌相鉴别。
PCR技术在大肠杆菌O157: H7检测中的应用
（3）原位PCR: kurokawa等不用培养过程,直接用原位PCR技术结合落射显微镜,在单细胞水平快速检测O157: H7 。
4.23SrRNA在大肠杆菌O157: H7分型、检测中的应用
传统的细菌分类方法主要依赖于细菌的形态学、代谢产物、酶活性和表面抗原等特征。随着现代分子生物学理论和技术的迅速发展，微生物检测进入了基因时代，以核糖体核糖核酸序列为基础的分类方法为微生物的鉴别提供了新的分子生物学方法。如16srRNA、 23srRNA、 16-23srRNA区间序列分析等等，它完全不同于传统方法，具有快速、简便、敏感和特异等优点。
23SrRNA基因特征：
原核生物的核糖体有三种大小（分别为23S、16S、 5S）的rRNA。目前已知23SrRNA基因全长序列的菌种数目已达250种。长度大约为3000pb。对许多细菌的23SrRNA基因序列分析发现，其序列的可变性比16SrRNA基因要明显，特别是亲源关系近的种系。利用这些可变区序列的差异可对相同菌种不同菌株进行分类鉴定。同时对已知23SrRNA基因序列分析也发现，在最初的520pb中有6个保守区域（5-10区域），并发现，这6个保守区域中6区段和10区段最保守，该序列在14个菌种中完全一致。
应用：
检测临床感染性疾病的病原菌 首先，将两条引物设计在保守区，成为通用引物，而在变异区中选择序列作为特异性探针，先用通用引物作PCR扩增，可筛选出含有病原菌的样本，再用特异性探针与扩增产物进行杂交，对目的细菌作出鉴定，达到诊断病原体及分型的目的。
鉴定特定细菌种属 目前认为，已发现的23SrRNA基因的IVSs具有种属特异性，可利用IVSs（插入序列）进行PCR扩增达到对某一种属细菌的诊断。
在流行病学方面的应用利用可变区序列的差异可对相同菌种不同菌株进行分析。为流行病提供依据。
除以上介绍的各方法外,常用的有效检测方法还有脉冲场电泳、随机扩增多态性DNA指纹分析、细胞毒试验等,在此不一一赘述。
大肠杆菌O157: H7的检验程序
样品 增菌6小时 磁珠浓缩
可疑菌落 山梨醇麦康凯琼脂
G染色 生化反应 血清学 毒力基因
大肠杆菌O157: H7实验室诊断依据
有下列情况之一具有实验室确诊意义：
1) 从腹泻病患者的粪便标本中分离出大肠杆菌O157: H7 ；
2) 经PCR或DNA杂交试验证实具有溶血素基因 及志贺样毒素基因；
3) 腹泻病患者恢复期血清抗O157LPS IgG抗体呈4倍升高；
4) 具有血性便的腹泻患者的急性期血清或恢复期血清，蛋白印记试验证实含有和O157LPS、EHEC溶血素或志贺毒素的特异性抗体．
小结
自从O157: H7被认识以来,对其基因的研究越来越细,已经探明了许多结构与功能基因,对其病因学、病理学及临床治疗方面均有很大促进作用。由于引起感染所需的O157: H7剂量很低,有必要发展一些灵敏度高的方法,用于快速有效地检测。另外,现已发现存在许多变异株,单用一种方法来检测往往是不够的。如发酵山梨醇的变异株用SMAC即不能检测到;由于许多非EHEC(EPEC、霍乱弧菌、志贺菌等)也可产生SLT,故单纯检测SLT也会产生假阳性结果。因此对一个样品的检测需结合使用多种方法才能获得准确的结果。
第三章 大肠菌群测定
一、大肠菌群检验
(一)检验方法
(二)培养基
(三)检验时应注意事
二、大肠菌群的卫生学意义
大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。该菌群主要来源于人及温血动物粪便，一般多用来作为食品中的粪便污染指标。过去我国在大肠菌群的检验方面经验不多，对该菌群的认识也不够充分。1974年全国修订食品卫生细菌检验方法座谈会和1976年全国食品卫生标准会议建议以大肠菌群作为粪便污染指标菌，并提出进行有关大肠菌群方面的科研工作。为此，我们成立了大肠菌群科研协作组，对犬肠菌群的检验方法(包括快速检验方法)及其卫生学意义进行了广泛的科学研究和实践，取得了一定成绩，为制订大肠菌群检验方法提供了科学依据。
在这次修订l976年版食品卫生检验方法的过程中，大肠菌群科研协作组又于1983～1985年对大肠菌群检验方法进行了实验研究，并作了对比观察，同时对国内常用的大肠菌群快速检测方法也进行了研讨，为这次修订国家标准食品卫生检验方法微生物学部分中的大肠菌群测定提供了科学依据。
大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出来的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。其定义为：系指一群需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。有些科学工作者又用靛基质、甲基红、V～P、柠檬酸盐、硫化氢、明胶、动力和44．5℃乳糖分解等试验，将这群细菌再分为大肠艾希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。不论分法如何，对大肠菌群的判定，均应以上述定义为基础。
一、大肠茵群检验
(一)检验方法
1．乳糖发酵试验。以无菌操作采取样品，采取量及稀释倍数，依据国家或当地卫生标准要求及样品污染情况而定。将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在l m J以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，lm1及1mI以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±l℃温箱内，培养24±2小时，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性；如有产气者，则按下列程序进行。
2．分离培养。将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±l℃温箱内，培养18～24小时，然后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色和证实试验。
3．证实试验。在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落l～2个进行革兰氏染色
6. 除了磁力珠外，生活中还有哪些易“威胁”到孩子的异物
我们都知道较小的孩子更困难，因为孩子们太小了，他们没有足够的认知，缺乏危险意识，缺乏识别事物的能力，多次父母稍微被忽视，孩子们可以稍微忽视。吞下一些更危险的东西，因为孩子太小了，所以我喜欢品尝一些新鲜的东西，我也吃了很多痛苦，还有许多异物对儿童造成危险：电池，纽扣，温度计，硬币，等。等等，我们日常生活中的各种东西，所以妈妈和爸爸必须注意。
不能幸运的许多父母发现孩子们没有吞下他们的异物，他们没有任何症状，而且他们很幸运，认为孩子没有任何东西，但很多东西在初始时期没有任何症状，所以父母不在的症状祝你好运。较小的孩子们，你需要注意的越多，特别是当你带孩子时，你必须集中注意力，不要做任何其他事情，否则孩子不会在孩子毫不含糊地承担。
7. 大家平时压力很大的时候都有哪些“解压神器”
现在的社会，竞争压力大，学习压力大，催生出很多的“解压神器”。
对于这些解压神器，众说纷纭，有人认为有用，有人认为没有用，我个人认为还是有一定用处的，除了缓解压力，还可以让枯燥工作和学习变得有趣。
话说回来，其实解压神器不能作为我们解压唯一的救命稻草，我们要适时的调节自身的心态，有一个规律的作息，没事多去户外踏青、锻炼身体、呼吸新鲜空气，遇到不开心的事情不要钻牛角尖，和身边正能量的人多接触，只有自己变得强大了，心里的压力才会越来越少！
最后我想说解压神器把它当成一个玩具还可以，特别是调节自己紧张工作时的临时心态会有一定的效果，不要过度依赖，偶尔玩玩还是很不错的！
8. 小孩子玩的磁珠具有哪些危险性
提起磁力珠想必大家并不陌生，这几乎已经成为了童年必玩的一个小玩具，但估计大家很难想象，就是这样的一个小小的磁力珠，已经使得不少孩子们遭罪，它甚至一度被称为新型的校园玩具杀手，因此，家长朋友们一定要谨慎购买给你的孩子们，因为一不小心就会让你的孩子受到伤害，有严重之甚至能够威胁到生命健康，那么这些小小的珠子究竟有什么样的危害呢？大家一起来看一下吧。
怎么样，看完这些后，你还敢不敢再给你的孩子购买这种玩具了？