㈠ wb跑內參和目的蛋白區別
wb跑內參和目的蛋白區別:wb跑內參內參通常是在被檢樣本中高表達且表達水平相對穩定的蛋白。WB可以對目的蛋白進行半定量分析,判斷不同樣品中目的蛋白表達含量的多少,就是取決於內參的標定。
WB又稱為免疫印跡 (immune blot) ,是根據抗原抗體的特異性結合半定量的檢測樣品中的某種蛋白的方法。
蛋白質印跡 (Western Blot),作為檢測蛋白表達及半定量的基礎實驗方法。
很多蛋白的表達是有組織特異性的,例如IL-10R,在視網膜,脾臟和肺腺癌組織中有高表達,其他組織表達含量較低;還有一些蛋白,則需要特定的刺激條件才會高表達,這種情況往往在磷酸化蛋白及炎症因子蛋白等中較為常見,如果未做特殊的處理,目的蛋白表達含量很低,無法被WB檢測出。
內參是western blot法非常重要而必須的部分。它保證了目的蛋白表達量的相對多少。內參是指由細胞中管家基因編碼的蛋白,其在各組織細胞中的表達相對穩定,因此在測定目的蛋白的相對水平時常用它做對照物。
內參抗體,是WB實驗中的重要參考,WB可以對目的蛋白進行半定量分析,判斷不同樣品中目的蛋白表達含量的多少,就是取決於內參的標定。內參選擇在WB實驗中是很關鍵的因素,可不是GAPDH或者β-actin萬用的哦。
內參如何選擇,最重要的決定因素就是目的蛋白,尤其是目的蛋白的表達位置及預處理條件。