A. 酵母雙雜交基本思想
酵母雙雜交技術由Fields在1989年提出，其靈感來源於對真核細胞轉錄因子，特別是酵母轉錄因子GAL4的研究。GAL4蛋白質包含兩個必需的結構域：DNA結合域（DNA-BD）和轉錄激活域（AD）。DNA-BD負責識別並結合位於GAL4效應基因上游激活序列，而AD則通過與轉錄機構其他成分的結合，啟動基因轉錄。單獨的DNA-BD和AD無法激活轉錄，但當它們在空間上接近時，便構成完整的GAL4轉錄因子，激活下游啟動子並促進基因轉錄。
為了實現這一技術，Fields構建了一個雙雜交系統。在這個系統中，DNA-BD與X蛋白融合，AD與Y蛋白融合。如果X和Y之間形成蛋白-蛋白復合物，GAL4的兩個結構域得以重組，進而啟動特異性基因序列的轉錄。Snf1與Snf4的相互作用是一個實例，其中Snf1是依賴絲氨酸、蘇氨酸的蛋白激酶，而Snf4是其結合蛋白。研究人員使用穿梭質粒將Snf1與BD融合，Snf4與AD融合，轉化到GGY：171菌株中。該菌株已刪除了相關轉錄因子基因，包含LacZ報告基因。實驗結果表明，Snf1和Snf4的相互作用使AD和BD在空間上接近，激活了報告基因LacZ的轉錄。
酵母雙雜交技術通常包括三個關鍵組件：誘餌（BD-X融合蛋白）、獵物（AD-Y融合蛋白）和報告基因。誘餌通常是已知蛋白，而獵物能顯示誘餌與獵物之間的相互作用。通過檢測報告基因的表達，可以推斷出誘餌和獵物是否相互作用。這一技術在研究蛋白質相互作用、信號轉導路徑以及功能基因組學等領域具有廣泛的應用。
(1)兒童dna和ad有什麼區別擴展閱讀
酵母雙雜交系統由Fields和Song等首先在研究真核基因轉錄調控中建立 i 。典型的真核生長轉錄因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二個不同的結構域： DNA結合結構域(DNA-binding domain)和轉錄激活結構域(transcription-activating domain)。前者可識別DNA上的特異序列， 並使轉錄激活結構域定位於所調節的基因的上游， 轉錄激活結構域可同轉錄復合體的其他成分作用， 啟動它所調節的基因的轉錄。